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Guias e Dicas
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técnicas de analises, Notas de aula de Biologia Celular

técnicas de analises de biologia

Tipologia: Notas de aula

2024

Compartilhado em 08/07/2025

beatriz-fpi
beatriz-fpi 🇧🇷

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Análise bioquímica
- Isolamento de células, organelas e de
macromoléculas
Isolar células do tecido
- Num tecido, há diferentes tipos de células
cada uma com sua função
- Primeiro, precisa separar as células
específicas
• O tecido tem mecanismo de adesão que as
mantém unidas, é necessário romper a matriz
e os mecanismo de adesão de uma célula e
outra
• Dissociação mecânica
(masserando/cortando)
• Enzimas proteoliticas (mecanismo de adesão
são formados por proteínas, então vai ser
quebrado)
Atendes que ligambou quelam o Ca2+
(agente quelante = agente que sequestra);
Retira o cálcio do meio facilitando a separação
de uma célula da outra
- Formar de recolher/isolar uma determinada
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➪Análise bioquímica

  • Isolamento de células, organelas e de macromoléculas ➪ Isolar células do tecido
  • Num tecido, há diferentes tipos de células cada uma com sua função
  • Primeiro, precisa separar as células específicas
  • O tecido tem mecanismo de adesão que as mantém unidas, é necessário romper a matriz e os mecanismo de adesão de uma célula e outra
  • Dissociação mecânica (masserando/cortando)
  • Enzimas proteoliticas (mecanismo de adesão são formados por proteínas, então vai ser quebrado)
  • Atendes que ligambou quelam o Ca2+ (agente quelante = agente que sequestra); Retira o cálcio do meio facilitando a separação de uma célula da outra
  • Formar de recolher/isolar uma determinada

célula

  • Separador de células ativados por fluorescência ⤷ Utilização de anticorpos que se liga especificamente em uma Ptn de membrana. Esse Ig pode tá associado a uma molécula fluorescente ⤷ Uma suspensão de células que entraram em contato com anticorpo. As células passam pelo aparelho e uma parte passa apenas uma célula por vez, nessa parte tem um laser flúoro... que vai marcar células que tem fluorescência tornando-a com carga positiva (?). Outras vão receber carga negativa ou não vao receber carga deixando neutra e então
  • Ultrassom ⤷ enlemeyer com uma haste metálica que tá ligada a um aparelho que vai liberar uma frequência sonora, fazendo que ocorra agitação. As células se agitam e até que se rompam
  • Detergente ⤷ Interage com os fosfolipídios, faz buracos na membrana e fazendo com que se romla
  • Mecanicamente

⤷Aa células são colocadas num (?), que vão sofrer uma pressão pra que passe por um orifício pequeno capaz de romper a ⤷ Por friquicao friquissao?

  • Com a suspensão de organelas, vai haver fracionamento das porções celulares
  • Centrifugação diferencial ⤷ Motor fixo ⤷ Se aproveita dos pesos/densidade diferentes de cada célula ⤷ Numa velocidade, a organela mais densa, ou seja, o núcleo, vai ficar no fundo do tubo e as outras em suspensão ⤷ Se a organela do estudo for a mitocôndria, a suspensão vai ser colocado em outro tubo e o núcleo é descartado ⤷ Em outra velocidade, vai para o fundo as mitocôndrias e lisossomos. Então o sobrenadante é descartado e vai... Se quiser estudar uma Ptn específica, precisa separar das outras moléculas

bolinhas de resina (não visíveis a olho nu) chamadas de beeds que irão preencher toda a coluna lã de vidro para não passar as bolinhas, só o líquido ⤷ o líquido vai passar pela a coluna (fase móvel) ⤷ A resina fica (fase fixa) ⤷ Diferentes proteínas passando, descendo junto ao líquido pela força da gravidade. As proteínas que de alguma forma que interagem com a fase estacionária, levam mais tempo para sair. Já as que não interagem, saem primeiro Tipos de cromatografia:

  • Troca iônica: separa as proteínas pela carga ⤷ precisa saber a carga da proteína em um determinado pH ⤷ Resina carrega um grupamento ★ Uma pode ter um grupamento negativo e outra grupamento positivo ★ Uma coluna ou é positiva ou negativa, nunca os dois

⤷ Uma coluna com beads positivo, as proteínas negativas vão interagir com a resina, então irão demorar muito mais que com as proteínas de carga positiva ⤷ Tem proteínas totalmente positiva, totalmente negativa e meio a meio ⤷ Vai alterando a concentração de sais ⤷ Há proteínas com mesma caraga, então pode ter contaminantes, então usa outra

com ionsbdo tampão ?) ou sal, que vai fazer com que a proteína mude a confirmação, afetando a afinidade com o anticorpo e o complexo anticorpo proteína é desfeito. Então, vai recolher a proteína sozinha

  • Eletroforese
  • "Gelatina" formada por uma malha, não é compacta
  • Tem furos para aplicar amostra
  • A parte onde aplica a amostra, tem o eletrodo negativo e na outra ponta um eletrodo positivo
  • É aplicado uma corrente elétrica (?) fazendo com que a amostra se desloque pelo tamanho
  • sistema de separação de amostras pelo tamanho
  • A proteína tem que ter carga negativa; Então a primeira coisa que precisa fazer é tornar a amostra de proteínas negativa ⤷ SDS - um detergente!; tem uma parte hidrofóbica (se insere no meio da Ptn) e um grupamento com carga negativa ⤷ Tratar com esse detergente, muda a conformacao da proteína e se associa ao SDS, assim conferindo carga negativa
  • conformação terciária - 1 cadeia polipetidica; estrutura quartenaria ouvir áudio
  • Gel de proteínas é de poliacrilamida ⤷ Duas placas de vidro ➪ Isolamento de DNA
  • fenol é uma substância que não se dissolve

em água ⤷ centrífuga duas fases: aquosa (ácidos nucléicos) e fase fenólica (proteínas são desnaturadas pelo fenol)

  • Etanol retira o DNA de solução (precipita - aquela nuvemzinha da parade do eppendorf); DNA não interage com etanol