Cromatografia
• Método físico-químico para estabelecer determinada separação
• Migração diferencial dos componentes de uma mistura
• Fase estacionária --- Fase móvel
• Inúmeras interações entre a fase móvel e a fase estacionária
• Fase estacionária: Líquida ou sólida
• Fase móvel: Líquida ou gasosa
Utilização:
• Identificação de compostos, por padrões previamente existentes.
• Purificação de compostos, separando-se substâncias indesejáveis.
• Separação dos componentes da mistura.
1. Interação de troca iônica: matriz(fase estacionária) constituída por partículas com carga
positiva ou negativa. A separação das proteínas depende de suas cargas elétricas.
2. Interação hidrofóbica: a matriz apresenta superfície hidrofóbica, retardando a migração
das proteínas hidrofóbicas.
3. Filtração em gel: a matriz atua apenas como uma peneira, por onde as proteínas migram
com velocidade variável, dependendo da forma e tamanho de suas moléculas.
4. Interação por afinidade: se baseia no fato de que muitas moléculas biológicas interagem
com alto grau de especificidade, como acontece entre as enzimas e seus substratos, entre certos
segmentos de DNA e RNA e entre antígenos e anticorpos. Técnica muito usada para purificação
de anticorpos.
