ppt cinetica enzimatica, Diapositivas de Bioquímica

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Enzimas

Cinética Enzimática

Velocidad de Reacción

´ La velocidad de una reacción está determinada por la concentración del o los sustratos y de una constante de Velocidad (k). aA + bB cC Ley de Velocidad: V = k [A] ⍺ [B] ß ´ k: es una constante de proporcionalidad. Refleja la probabilidad de reacción, bajo determinadas condiciones de reacción ( T, P, pH). ´ Orden de la reacción ( ⍺ + ß ), relacionada con la molecularidad y no son los coeficientes estequiométricos, determina el efecto de la concentración de los sustratos en la velocidad de la reacción.

Saturación de la enzima Una Enzima se saturada cuando los sitios activos de todas las moléculas están ocupados, y como consecuancia la reacción no puede acelerarse mediante adición de sustrato, sea cual sea la cantidad añadida. En un gráfico la velocidad de reacción en función de la concentración de sustrato se alcanza una meseta

´ Para estudiar el mecanismo de reacción se determinan velocidades iniciales (V 0 ). ´ La cantidad de producto formado es despreciable. ´ Se minimizan factores tales como reversibilidad a reactantes, inhibición por el producto, que complicarían la determinación mecanística. V=

MODELO MICHAELIS-MENTEN

´ Considera la formación de un complejo Enzima-Sustrato [ES]. ´ Asume un equilibrio rápido entre el complejo ES y la enzima libre. ´ Asume la transformación del complejo ES en producto es el paso más lento. ´ La tranformación de ES en P, es el determinante de la velocidad de la reacción global. E + S ES E + P k- 1 k 1 k 2 V 0 = k 2 [ES]

Efecto del [sustrato] en la v 0 enzimática Modelo de Michaelis-Menten.

4. (^) 6)
5. (^) 8) Condición de estado estacionario k 1 [S] [E] = k 2 [ES] + k- 1 [ES] V 0 = k 2 [ES]

= k+2[ET] Enzima Saturada VMax= k 2 [E]T [E]T = concentración enzima total

Representación de Lineweaver-Burk o Gráfica de dobles recíprocos 𝑌 = 𝑚 1 𝑆

• 𝑛 Es la ecuación de una recta

• 1

1/S 1/Vo sin 6250 34000 3125 26500 2500 25400 1250 21700 833 20161 625 19208 y = 2,5819x + 18219 R² = 0, 0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 35000 40000 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 Doble recíproco 1/V 0 1/[PNPP]

Si k 2 <<< k (^) - 1 , entonces Interpretación de parámetros cinéticos KM = k- 1 k 1 = Kd (constante de disociación del complejo ES) Sólo en esta condición KM representa una medida de la afinidad de E por S en el complejo ES KM = k 2 + k- 1 k 1 k 2 E + S ES E + P k- 1 k 1 Mientras mayor sea Km=Kd menor sería la afinidad de la enzima por el sustrato

Vmax = k 2 [E]T Vmax = kcat [E] (^) T kcat : constante de velocidad del paso limitante para cualquier reacción enzimática (es de primer orden (s- 1 ) kcat denominada número de recambio. kcat : El numero de recambio o kcat, de una enzima es el número de moléculas de sustrato que transforma en producto una molécula de enzima por unidad de tiempo, cuando la enzima se encuentra saturada de sustrato k 2 E + S ES E + P k- 1 k 1