MUESTREO
Proceso de selección de un material q proporcione info sobre el sistema en estudio, el cual debe ser representativo de todo el material.
▪ Tomar una porción adecuada del material en estudio.
▪ Transportarlo en forma adecuada.
▪ Representativo.
▪ Evitar la alteración de la muestra tomada.
PROCEDIMIENTO GENERAL DE MUESTREO
1. Muestra:
→ Tipo de muestra
→ Cantidad que se dispone (diseño estadístico)
→ Número, localización de las extracciones
→ Características especiales: luz, temperatura
→ Contenedores: envases donde se guardan las muestras tomadas según cantidad y tipo de muestras, acondicionamiento
2. Personal: entrenado, indumentaria, normas de seguridad.
3. Acondicionamiento:
→ Acondicionamiento adecuado de la muestra previo análisis
→ Rotulado
→ Contra muestras
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
¿Por qué realizar un tratamiento previo de la muestra al análisis?
- Limpiar la muestra para mejorar la identificación de los analitos (aumentando la selectividad)
- Concentrar para mejorar la cuantificación
- Extender vida de las columnas cromatográficas
TRATAMIENTO PREVIO DE LA MUESTRA
1. Dilución: En contexto analítico debe ser exacta y precisa.
2. Filtración: Filtro muestra utilizando filtros de distintos poros porque esto limpia la muestra de cualquier suciedad, haciendo que esta se quede en
el filtro y mi muestra que contiene al analito pase. Es un proceso que sirve para sacar cosas que están en suspensión, s i ya están disueltas en la
muestra van a pasar por el filtro.
3. Precipitación: proteínas
Suele ser consecuencia de la desnaturalización de las proteínas, que es la pérdida de su estructura superior (no pierden la p rimaria) quedando la
cadena polipeptídica reducida un polímero sin ninguna estructura tridimensional fija. Y aunque la renaturalización ocurra nunca vuelven a ser
funcionales. Lo que queremos sacar es a las proteínas, precipitándolas, separando sobrenadante del pellet. Igualmente puede ser que las precipito
porque las voy a analizar o no y las descarto.
Hay agentes desnaturalizantes físicos (temperatura) y químicos (detergentes, pH, fuerza iónica, disolventes orgánicos). También se puede llevar a
cabo la desproteinización por diálisis.
4. Centrifugación
Se basa en hacer girar un tubo a gran velocidad de forma que se produzca la acumulación en el fondo del mismo de la s partícul as que tienden a
hundirse por tener una densidad mayor que la del medio en que se encuentran. Después de esto, la muestra s e habrá separado en 2 fracciones:
sobrenadante (fracción homogénea que no ha sedimentado) y pellet (sedimento q ha quedado en el fondo del tubo).
5. Filtración molecular
Filtración convencional: S epara partículas suspendidas en fluidos. Las suspensiones p asan a través de un material poroso, en el que las partículas
quedan retenidas y pueden ser separadas del fluido.
Filtración molecular: uso de membranas semipermeables que permiten separar moléculas disueltas en función de su tamaño.
- La diálisis es uno de los métodos de filtración molecular más utilizados. Se coloca en sn acuosa, que contiene moléculas de distintos
tamaños, dentro de una bolsa de diálisis que se encuentra a su vez sumergida en un gran volumen de un buffer determinado.
