Glucosa Hexoquinasa FS – Página 1 * Fluid Stable = líquido estable
Glucosa Hexoquinasa FS *
Reactivo para la determinación cuantitativa In Vitro de glucosa en suero, plasma u orina en equipos
fotométricos
Información de pedido
Nº de pedido Tamaño del envase
1 2511 99 10 021 R1
4 x
20 mL
+ R2
1 x 20 mL
+ 1 x
3 mL
Estándar
1 2511 99 10 026 R1
5 x
80 mL
+ R2
1 x 100 mL
1 2511 99 10 023 R1
1 x
800 mL
+ R2
1 x 200 mL
1 2511 99 10 704 R1
8 x
50 mL
+ R2
8 x 12,5 mL
1 2511 99 10 917 R1
8 x
60 mL
+ R2
8 x 15 mL
1 2500 99 10 030 6 x
3 mL
Estándar
Resumen [1,2]
La determinación de la concentración de glucosa en suero o plasma se
emplea especialmente en el diagnóstico y m onitorización terapéutica en la
diabetes m ellitus. Otras aplic aciones son la detección de la hipo glucemia
neonatal, la exclusión de un posible carci noma insular pancreático, así
como la valoración del intercambio de los hidratos de carbono en
diferentes patologías.
Método
Test UV enzimático con hexoquinasa
Principio
Glucosa + ATP HK > glucosa-6-fosfato + AD P
Glucosa-6-fosfato + NAD
+
G6P-DH > gluconato-6-P + NADH + H
+
Reactivos
Componentes y concentraciones
R1: Solución amortiguadora TRIS pH 7,8 100 mmol/L
Mg
2+
4 mmol/L
ATP 2,1 mmol/L
NAD 2,1 mmol/L
R2: Mg
2+
4 mmol/L
Hexoquinasa (HK) ≥ 7,5 kU/L
Glucosa-6-fosfatodeshidrogenasa
(G6P-DH) ≥ 7,5 kU/L
Estándar: 100 mg/dL (5,55 mmol/L)
Conservación y estabilidad de los reactivos
El reactivo y el estánd ar se pueden conservar a una temperatura de
2 a 8 °C hasta el final del mes de caducidad indicado en el envase,
siempre que se evite la contaminación una vez abiertos los frascos. ¡No se
deben congelar los reactivos! Mantener los reactivos y el estándar
protegidos de la luz.
Advertencias y medidas de precaución
1. Los reactivos contienen a zida de sodio (0,95 g/L) como conservante.
¡No ingerir! Evitar el contacto con la piel y las mucos as.
2. El reactivo 2 contiene material de origen animal. Tratar el producto
como potencialmente infeccioso según las precauciones universales
y la buena práctica de laboratorio.
3. Excepcionalmente pue den obtenerse valores erróneos en muestras
de pacientes con gammapatías [6].
4. Consultar las fichas de seguridad de los reactivos y observar todas
las medidas de precauci ón necesarias para la manipulación de
reactivos de laboratorio. Para un correcto diagnóstico, se recomienda
evaluar los resultados según la historia m édica del paciente, los
exámenes clínicos así como los resultados obtenidos con otros
parámetros.
5. ¡Únicamente para el empleo profesional!
Eliminación de residuos
Obsérvese la normativa legal al respecto.
Equipo adicional necesario
Solución de NaCl 9 g/L
Equipo usual de laboratorio
Preparación de los reactivos
El estándar es listo para usar.
Procedimiento del substrato
Los reactivos son listos para usar.
Procedimiento de medida con reactivo de uso y muestra
Mezclar 4 partes de R1 + 1 parte de R2
(p. ej. 20 mL R1 + 5 mL R2) = reactivo de uso.
Estabilidad al almacenamiento:
3 meses entre 2 y 8 °C
3 semanas entre 15 y 25 °C
¡Proteger los reactivos de uso de la luz directa!
Muestras
Suero, plasma u orina
Separar del contenido celular a más tardar 1 hora después de la toma de
la muestra.
Estabilidad en plasma después de la adición de un inhi bidor glic olítico
(fluoruro, mono-yodo-acetato, manosa) [3]:
2 días de 20 a 25 °C
7 días de 4 a 8 °C
1 día a –20 °C
Estabilidad en s uero (separado del contenido celular, no hemolítico) sin
adición de un inhibidor glicolítico [2,4]:
8 horas a 25 °C
72 horas a 4 °C
Estabilidad en la orina [3]:
2 horas entre 20 y 25 °C
2 horas entre 4 y 8 °C
¡Congelar sólo una vez! ¡Desechar las muestras contam inadas!
Esquema de la prueba
Hay disponibles, a petición, aplicaciones para si stemas automáticos.
Longitud de onda 340 nm, Hg 334 nm , Hg 365 nm
Paso óptico 1 cm
Temperatura de 20 a 25 °C/a 37 °C
Método de medida Respecto blanco de reactivo
Procedimiento del substrato
Blanco Muestra o
Estándar
Muestra o Estándar - 10 µL
Agua destilada 10 µL -
Reactivo 1 1000 µL 1000 µL
Mezclar y incubar 1 – 5 min. entre 20 - 25 °C/37 °C. Leer la absorbancia
A1 y, a continuación añadir:
Reactivo 2 250 µL 250 µL
Mezclar, incubar 5 min. a 37 °C ó 10 min. de 20 a 25 °C. Leer la
absorbancia A2 al cabo de 30 min. comparando con el blanco de reactivo.
∆A = (A2 – A1) Muestra/EstándarProcedimiento de me dida con reactivo
de uso y muestra
Blanco Muestra o
Estándar
Muestra o Estándar - 10 µL
Agua destilada 10 µL -
reactivo de uso 1000 µL 1000 µL
Mezclar, incubar 5 min. a 37 °C o 10 mi n. de 20 a 25 °C. Leer la
absorbancia al cabo de 30 min. comparando con el blanco de reactivo.
∆A = A Muestra/Estándar
Nota:
En el procedimiento de medida con reactivo de uso y muestra sólo se
recomienda el pip eteado como modo operativo en equipos de análisis c on
corrección del valor de referencia de las muestras (por ejemplo, medi ante
medición bicromática). En el rango de la longitud de onda, las muestras de
suero y plasma con frecuencia presentan un elevado nivel propio de
extinciones que pueden causar la aparición de falsos valores de glucosa
altos. Los factores de conversión indicados no se pueden emplear en
mediciones bicromáticas.
Cálculo
Con factor
Para calcular la concentración de glucosa se multiplica ∆A c on el
correspondiente factor f de la siguiente tabla:
Procedimiento del substrato f [mg/dL] f [mmol/L]
340 nm 361 20,0
Hg 334 nm 367 20,5
Hg 365 nm 667 37,1
