BAL
BACILLUS
STREPTOMYCES
D. DE HC/PLAGUICIDAS
MUESTRA
Específico del huésped. Proximidad de ambiente.
Leche, yogurt. Suelo.
Compleja: suelo, agua. Coexisten
diversos mo.
Suelo, muestra
compleja.
Muestra de suelo expuesto a HC/plag
por muchos años.
ENRIQUECIMIENTO
Leche, no necesario, ya es microbiota
predominante.
Suelo, sí es necesario (muestra compleja) → caldo
MRS 48-72hs a 37°C microaerofilia/anaerobiosis.
Sí, es necesario al ser muestra
compleja. 80°C durante 15 min
suspensión de muestra en agua. Cél
vegetativas son destruidas, solo
quedan endosporas. Se siembra en
medio Zhang líquido, 37°C 18-24hs
en aerobiosis. Citrato de sodio como f
de C. sales de Ca y Mg; esto permite
a endosporas de Bacillus germinar y
crecer en detrimento de otros mo
Sí, en medio de cultivo
conteniendo materia
orgánica compleja como
sales minerales y
sustancias poliméricas
ya que tienen enz
necesarias p/desdoblar
y degradar dichos
componentes.
Si bien es una muestra de suelo
(compleja), las características
metabólicas de estos mo de interés
harán que, si están presentes en la
muestra, sean las únicas sobrevivientes,
capaces de degradar HC cuando
sembremos. Pero se puede hacer
enriquecimiento p/aumentar n°,
p/aumentar chances de aislarlo. Medio
salino (medio definido con NaCl xq
ambientes contaminados con HCs tienen
altas concentraciones de sales; son
halófilos y halotolerantes) líq con
Tween20 como ag dispersante
p/favorecer la liberación de mo y los HCs
de las partículas del suelo y combustible
como f de C. Incubación en agitación, 7
días a 30°C. La agitación favorece la
difusión del O2 de manera uniforme en
todo el medio (mo aerobios).
P/xenobióticos igual salvo que medio
basal mineral liq p/enr.
AISLAMIENTO
Exigentes nutricionalmente. Dil seriadas en MRS.
Glu como f.C. Peptona/triptona, extracto de
carne/levadura p/f.N, prot, aa, vit y factores de
crecimiento. Tween80 inhibe microbiota
acompañante y BAL degradan p/utilizar AG. Sales
de Na/Mg/Mn como cofactores de procesos
metabólicos y f.S. Buffer. Mezcla de aa, BN
púricas/pirimídicas + vit.
Tomo inóculo de medio
enriquecimiento Zhang, diluciones
seriadas. Medio complejo ETA con
triptona/extracto levadura como f de
N, factores crecimiento y minerales.
Medio sólido, no
requieren factores
nutricionales.
Medio salino agarizado (HC) con
combustible (gasoil, nafta) como f de C e
H, dador de e- y fuente de E. Diluciones
seriadas……….
Medio basal mineral agarizado
(xenobióticos). Dil seriadas en agua
peptonada. Siempre en MBM + glifosato
(mo usarán glifosato como f de C), MBM
+ Glu + Glif y s/sales de P (mo usarán glif
como f de fósforo), MBM + Glu + Glif y
s/sales de amonio (mo usarán glif como f
de N). Aquellos medios adicionados con
Glu permiten que, los mo a desarrollar
en esos medios, utilicen la Glu como
fuente de C y no el glifosato.
